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什么是LAMP？

LAMP即环介导等温扩增（Loop-Mediated Isothermal Amplification，LAMP），是由日本科学家 Notomi 等人在2000年开发的一项适用于基因诊断的恒温核酸扩增技术，其使用具有链置换特性的DNA聚合酶，通过2-3对基因特异性引物，在等温条件下（通常为 60-65°C）快速扩增靶标序列。与传统的 PCR 技术相比，LAMP 技术具有操作简单、扩增速度快、对设备要求低等优点，特别适合资源有限的现场检测和即时诊断。目前LAMP技术已从实验室逐渐走向检验一线，覆盖包含临床传染病检测、疫情防控、海关检疫、食品与药品安全检测、环境监测等各种领域。

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LAMP技术难点

自2000 年首次报道后，LAMP并未像PCR一样被全世界的生物实验室广泛使用，除开其技术专利问题，主要有两方面的原因：其一LAMP的引物设计比较复杂，部分靶标在有限的扩增区域内，很难设计出几组合适的引物，腾挪空间太小。其二，由于其扩增迅速，很容易出现非特异扩增，导致假阳性结果。

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翌圣生物解决方案

1、引物设计，推荐在线引物设计软件http://primerexplorer.jp/e/ ，每个靶标选择2-3套引物在LAMP实验中进行测试筛选，同时，引入环状引物加快反应速度。

2、非特异扩增，推荐翌圣生物最新升级的荧光染料法RT-LAMP试剂（Cat#16729/16730），其采用新一代适配体封闭的Bst Plus DNA Polymerase，搭配精细优化的缓冲体系，实现高效快速和高特异性的扩增，并且可支持室温配置反应体系。

产品介绍

荧光染料法RT-LAMP试剂

LAMP扩增检测结果主要分为两种方式: 终点法（琼脂糖凝胶电泳法、比浊法、目测法等）和实时荧光法（染料法、探针法等）。荧光染料法RT-LAMP是将荧光染料（如SYBR Green、Syto等）作为荧光标记物，在扩增反应中与双链DNA结合后，荧光信号会增强800-1000倍。使用荧光定量PCR仪在60-65℃恒温条件下进行测试，约30min后即可通过扩增结果判断是否感染病原体，还可搭配微流控芯片或便携式检测仪快速检测。

图1. LAMP扩增流程

推荐产品

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RT-LAMP Fluorescent Assay Kit(Bst Plus)（16729ES）

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RT-LAMP Lyo-Ready Fluorescent Assay Kit(Bst Plus)（16730ES）-可冻干

产品特点

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通用性

验证20多对动物和人相关的病原靶标，GC含量30%-65%，阳性出峰时间与市面上同类产品相当。

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特异性

验证多组DNA和RNA靶标，特异性均优于市面同类产品，60min内NTC无非特异起峰，或出峰时间晚于竞品。03

灵敏度

检测真实样本提取的非洲猪瘟核酸，灵敏度可达15拷贝/反应；检测乙型流感病毒质控品，灵敏度可达10拷贝/反应。

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稳定性

反复冻融20次性能不受影响；37℃热加速7天性能不受影响；支持室温配置反应体系。

性能展示

1、在多个LAMP和RT-LAMP体系、不同模板浓度下，对比测试翌圣16729、16730和Supplier A的扩增性能，结果显示：在不同体系下，16729/16730的扩增性能与Supplier A无显著差异，且特异性更好。

2、采用真实样本提取的非洲猪瘟样本核酸，以及乙型流感病毒质控品，用数字PCR定量模板浓度后，测试16729/16730的检出情况，检出定义为30min以内起峰，结果显示16729/16730检测灵敏度优异。

3、在多个LAMP、RT-LAMP体系中，同时测试16729/16730反复冻融、热加速后的试剂与-20℃正常保存试剂（T0）的性能，结果显示：16729/16730反复冻融20次、37℃ 放置7天后，阳性检出不受影响，且无非特异扩增，产品稳定性好。

翌圣生物在酶原料领域深耕多年，长期为IVD企业、第三方检验机构、科研机构等提供高品质、高性价比的分子诊断原料，包括逆转录酶、Taq DNA Polymerase、Bst DNA Polymerase、Bsu DNA Polymerase、抗体、dNTPs等单组份以及经过体系优化的qPCR、LAMP、RPA等预混液，可为临床/非临床诊断试剂盒开发提供性能优越、稳定的酶原料。

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